ⅠNუკლეინის მჟავაiშესავალი
ნუკლეინის მჟავა იყოფა დეზოქსირიბონუკლეინის მჟავად (დნმ) და რიბონუკლეინის მჟავად (რნმ), რომელთა შორის რნმ იყოფა რიბოსომურ რნმ-ად (rRNA), მესინჯერ რნმ-ად (mRNA) და გადამტანი რნმ (tRNA) მისი სხვადასხვა ფუნქციების მიხედვით.დნმ ძირითადად კონცენტრირებულია ბირთვში, მიტოქონდრიაში და ქლოროფორმში, ხოლო რნმ ძირითადად ციტოპლაზმაშია გავრცელებული.როგორც გენის გამოხატვის მატერიალური საფუძველი, ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქცია უაღრესად მნიშვნელოვან როლს ასრულებს მოლეკულური ბიოლოგიის კვლევასა და კლინიკურ მოლეკულურ დიაგნოზში.ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის კონცენტრაცია და სისუფთავე პირდაპირ გავლენას მოახდენს შემდგომ PCR-ზე, თანმიმდევრულობაზე, ვექტორის აგებულებაზე, ფერმენტის მონელებაზე და სხვა ექსპერიმენტებზე.
Ⅱ ნუკლეინის მჟავის მოპოვებისა და გაწმენდის მეთოდი
① ფენოლი/ქლოროფორმის ექსტრაქციის მეთოდი
ფენოლის/ქლოროფორმის ექსტრაქცია არის დნმ-ის ექსტრაქციის კლასიკური მეთოდი, რომელიც ძირითადად იყენებს ორ განსხვავებულ ორგანულ გამხსნელს ნიმუშების დასამუშავებლად, დნმ-ზე დაფუძნებული ნუკლეინის მჟავას წყლის ფაზაში, ლიპიდებს ორგანულ ფაზაში და ცილებს ორ ფაზას შორის.ამ მეთოდს აქვს უპირატესობა დაბალი ღირებულება, მაღალი სისუფთავე და კარგი ეფექტი.ნაკლოვანებები არის რთული ოპერაცია და ხანგრძლივი დრო.
② ტრიზოლის მეთოდი
ტრიზოლის მეთოდი რნმ-ის ექსტრაქციის კლასიკური მეთოდია.ტრიზოლის მეთოდი იყოფა წყლის ფაზად და ორგანულ ფაზად ქლოროფორმით ცენტრიფუგაციის შემდეგ, რომელშიც რნმ იხსნება წყალ ფაზაში, წყლის ფაზა გადადის ახალ EP მილში, ნალექი მიიღება იზოპროპანოლის დამატების შემდეგ და შემდეგ ეთანოლის გაწმენდის შემდეგ.ეს მეთოდი შესაფერისია რნმ-ის ექსტრაქციისთვის ცხოველთა ქსოვილებიდან, უჯრედებიდან და ბაქტერიებიდან.
③ ცენტრიდანული სვეტის გაწმენდის მეთოდი
ცენტრიფუგის სვეტის გაწმენდის მეთოდს შეუძლია დნმ-ის ადსორბცია სპეციალურად სილიციუმის მატრიცის ადსორბციული მასალების მეშვეობით, ხოლო რნმ-ს და ცილას შეუძლია შეუფერხებლად გაიაროს და შემდეგ გამოიყენოს მაღალი მარილის დაბალი PH ნუკლეინის მჟავის შერწყმა, დაბალი მარილის მაღალი PH მნიშვნელობის ელუცია ნუკლეინის მჟავის გამოყოფისა და გასაწმენდად.უპირატესობებია მაღალი გამწმენდი კონცენტრაცია, მაღალი სტაბილურობა, ორგანული გამხსნელის საჭიროება და დაბალი ღირებულება.მინუსი არის ის, რომ საჭიროა ეტაპობრივად ცენტრიფუგირება, მეტი ოპერაციის საფეხურები.
④ მაგნიტური მძივების მეთოდი
მაგნიტური მარცვლების მეთოდია უჯრედის ქსოვილის ნიმუშის გაყოფა ლიზატის მეშვეობით, გამოყოფს ნუკლეინის მჟავას ნიმუშში და შემდეგ ნუკლეინის მჟავის მოლეკულები სპეციალურად შეიწოვება მაგნიტური მძივის ზედაპირზე, ხოლო მინარევები, როგორიცაა ცილები და შაქარი, რჩება სითხე.უჯრედის ქსოვილის გაყოფის საფეხურებით, ნუკლეინის მჟავასთან მაგნიტური მარცვლების შეერთებით, ნუკლეინის მჟავით რეცხვით, ნუკლეინის მჟავით გამორეცხვით და ა.შ. საბოლოოდ მიიღება სუფთა ნუკლეინის მჟავა.უპირატესობებია მარტივი ოპერაცია და ხანმოკლე გამოყენება, საფეხურების ცენტრიფუგაციის საჭიროების გარეშე.მას აქვს დაბალი ტექნიკური მოთხოვნები და შეუძლია განახორციელოს ავტომატური და მასიური მუშაობა.მაგნიტური მძივისა და ნუკლეინის მჟავის სპეციფიკური კომბინაცია ქმნის მოპოვებულ ნუკლეინის მჟავას მაღალი კონცენტრაციით და სისუფთავით.მინუსი არის ის, რომ ამჟამინდელი საბაზრო ფასი შედარებით ძვირია.
⑤ სხვა მეთოდები
ზემოაღნიშნული ოთხი მეთოდის გარდა, არსებობს დუღილის კრეკინგი, კონცენტრირებული მარილის მეთოდი, ანიონური სარეცხი მეთოდი, ულტრაბგერითი მეთოდი და ფერმენტული მეთოდი და ა.შ.
Ⅲ ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქციის ტიპი
Foregene-ს აქვს მსოფლიოში წამყვანი Direct PCR პლატფორმა, ორსვეტიანი რნმ-ის იზოლაციის პლატფორმა (მხოლოდ დნმ + რნმ მხოლოდ).ძირითადი პროდუქტები მოიცავს დნმ/რნმ-ის იზოლაციის კომპლექტებს, PCR და პირდაპირი PCR რეაგენტების მოლეკულური ლაბორატორიული რეაგენტების სერიას.
① რნმ-ის მთლიანი ექსტრაქცია
მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის ნიმუშები მოიცავს სისხლს, უჯრედებს, ცხოველთა ქსოვილებს, მცენარეებს, ვირუსებს და ა.შ. მთლიანი რნმ-ის მაღალი სისუფთავის და მაღალი კონცენტრაციის მიღება შესაძლებელია მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის მეშვეობით, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას RT-PCR-ში, ჩიპის ანალიზში, ინ ვიტრო ტრანსლაციაში. მოლეკულური კლონირება, Dot Blot და სხვა ექსპერიმენტები.
Foregene დაკავშირებულირნმ-ის იზოლაციის ნაკრები
ცხოველის მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები--სწრაფად და ეფექტურად ამოიღეთ მაღალი სისუფთავის და მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ ცხოველების სხვადასხვა ქსოვილებიდან.
უჯრედის მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები--მაღალგანწმენდილი და მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ შეიძლება მიღებულ იქნას სხვადასხვა კულტივირებული უჯრედებიდან 11 წუთში.
მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები--სწრაფად ამოიღეთ მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ მცენარის ნიმუშებიდან პოლისაქარიდების და პოლიფენოლის დაბალი შემცველობით.
ვირუსული რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები-- სწრაფად იზოლირება და გაწმენდა ვირუსული რნმ ნიმუშებისგან, როგორიცაა პლაზმა, შრატი, უჯრედებისგან თავისუფალი სხეულის სითხეები და უჯრედული კულტურის სუპერნატანტები.
② გენომიური დნმ-ის ექსტრაქცია
გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ნიმუშები მოიცავს ნიადაგს, განავალს, სისხლს, უჯრედებს, ცხოველურ ქსოვილებს, მცენარეებს, ვირუსებს და ა.შ. - გამტარუნარიანობის თანმიმდევრობა და სხვა ექსპერიმენტები.
Foregene დაკავშირებულიდნმ-ის იზოლაციის ნაკრები
ცხოველთა ქსოვილის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები--გენომის დნმ-ის სწრაფი მოპოვება და გაწმენდა მრავალი წყაროდან, როგორიცაა ცხოველური ქსოვილები, უჯრედები და ა.შ.
სისხლის დნმ-ის Midi ნაკრები (1-5მლ)-- სწრაფად გაწმენდა მაღალი ხარისხის გენომიური დნმ ანტიკოაგულირებული სისხლიდან (1-5მლ).
ბუკალური ნაცხი/FTA ბარათის დნმ-ის იზოლაციის ნაკრები-- სწრაფად გაწმინდეთ მაღალი ხარისხის გენომიური დნმ ბუკალური ნაცხის/FTA ბარათის ნიმუშებიდან.
მცენარეთა დნმ-ის იზოლაციის ნაკრები- სწრაფად გაწმინდეთ და მიიღეთ მაღალი ხარისხის გენომიური დნმ მცენარის ნიმუშებიდან (პოლისაქარიდებისა და პოლიფენოლის მცენარის ნიმუშების ჩათვლით)
③ პლაზმიდის ექსტრაქცია
პლაზმიდი არის ერთგვარი წრიული მცირე მოლეკულის დნმ უჯრედებში, რომელიც წარმოადგენს დნმ-ის რეკომბინაციის საერთო მატარებელს.პლაზმიდის ექსტრაქციის მეთოდია რნმ-ის ამოღება, პლაზმიდის გამოყოფა ბაქტერიული გენომის დნმ-ისგან და ცილის და სხვა მინარევების მოცილება შედარებით სუფთა პლაზმიდის მისაღებად.
გენერალური პლაზმიდის მინი ნაკრები-- სწრაფად გაწმინდეთ მაღალი ხარისხის პლაზმიდური დნმ ტრანსფორმირებული ბაქტერიებისგან რუტინული მოლეკულური ბიოლოგიის ექსპერიმენტებისთვის, როგორიცაა ტრანსფორმაცია და ფერმენტის მონელება
④ ექსტრაქციის სხვა ტიპები, miRNA ექსტრაქცია და ა.შ.
ცხოველთა miRNA იზოლაციის ნაკრები- სწრაფად და ეფექტურად ამოიღეთ 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA რნმ-ის მცირე ფრაგმენტები ცხოველთა სხვადასხვა ქსოვილებიდან და უჯრედებიდან.
Ⅳ მოთხოვნები ნუკლეინის მჟავას მოპოვებისა და გაწმენდის შედეგისთვისs
① ნუკლეინის მჟავის პირველადი სტრუქტურის მთლიანობის უზრუნველსაყოფად.
② შეამცირეთ ცილების, შაქრების, ლიპიდების და სხვა მაკრომოლეკულების ჩარევა
③ არ უნდა არსებობდეს ორგანული გამხსნელი ან ლითონის იონების მაღალი კონცენტრაცია, რომელსაც შეუძლია შეაფერხოს ფერმენტი ნუკლეინის მჟავას ნიმუშებში.
④ რნმ და სხვა ნუკლეინის მჟავით დაბინძურება უნდა აღმოიფხვრას დნმ-ის მოპოვებისას და პირიქით.
გამოქვეყნების დრო: ნოე-24-2022
